کلون سازی، تعیین توالی و بیان ژن آسپاراژیناز باکتری اروینیا کریزانتمی

سابقه و هدف: آنزیم l - آسپاراژیناز داروی موثر در درمان لوکمی لنفوبلاستیک و لنفومای غیرهوچکینی است. مهم ترین باکتری های مولد این آنزیم باکتری های اشریشیا کلی و گونه های مختلف اروینیا به ویژه اروینیا کریزانتمی می باشند.هدف از این پژوهش، ارزیابی آنزیم l-آسپاراژیناز باکتری اروینیا کریزانتمی dsm 4610 بود. مواد و روش ها: در ابتدا dna ژنومی باکتری استخراج و پس از طراحی پرایمرهای اختصاصی echr asn f و echr asn r1 آزمون pcr انجام شد.در مرحله بعد، این ژن درون وکتورptz57r/t  الحاق و به درون سلول میزبان اشریشا کلی dh5α وارد شد و پلاسمیدهای نوترکیب استخراج گردیدند. پس از تعیین توالی، نتایج توسط نرم افزارdnaman مورد بررسی قرار گرفت. با طراحی پرایمرهای بیانی، همسانه سازی در ناقل paed4 انجام شد و پس از تراریخت نمودن سلول های اشریشیا کلی bl21(de3) بیان پروتئین با روش sds-page ارزیابی شد. یافته ها: ژن جدا شده از سویه اروینیا کریزانتمی dsm4610 تفاوت های مشخصی با سایر ژن های مربوط به این آنزیم در بانک ژن داشت و با شماره دسترسی jf972567 در بانک ژن ثبت شد. بیشترین میزان بیان پروتئین پس از فرآیند بهینه سازی در شرایط. غلظت نیم میلی مولار iptg ، محیط کشت lb broth و دمای 37 درجه سانتی­گراد حاصل گردید. الکتروفورز پروتئین روی ژل sds-page ، پروتئینی به وزن مولکولی تقریبا 5/37 کیلودالتون را نشان داد . نتیجه گیری: نتایج این پژوهش نشان داد که آنزیم l-آسپاراژیناز باکتری اروینیا کریزانتمی، شرایط مناسب برای مطالعات بیشتر به عنوان یک آنزیم ضدلوکمی را دارد.